Extracción de ADN

Extracción de ADN

La extracción del ADN es una técnica moderna de la biología que es utilizada para fines terapéuticos, de ingeniería genética y la investigación en casos legales. Es uno de los pasos previos para la aplicación de la prueba de PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) en la que se puede crear un número de copias de segmentos de ADN y amplificarlos para su estudio.

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Ayudados de un ejemplo identificaremos los pasos para la extracción del ADN.

Artículo Científico:

 IDENTIFICACIÓN DIFERENCIAL DE AISLADOS CLÍNICOS DE Mycobacterium tuberculosis Y Mycobacterium bovis POR UN ENSAYO DE PCR MÚLTIPLE. 

Se realiza la extracción del ADN para poder identificar diferencias génicas entre M. tuberculosis y M. bovis en pacientes que presentan tuberculosis.

TIPO DE MUESTRA: Esputo (secreción o flema de los pulmones) de pacientes con tuberculosis.

LISIS.-Se rompe la membrana citoplasmática y nuclear de las células para liberar el ADN. En este caso se coloca un poco de la colonia de la bacteria en un tubo de ensayo, se somete a una temperatura de 90 grados centígrados por una hora, luego se coloca etanol al 70% por 6 horas y SDS al 10% .

SEPARACIÓN.- Sirve para separar todos los materiales que se encuentran en la muestra permitiendo que lo sólido se precipite. En el ejemplo para este procedimiento se utiliza: Centrífuga a 14 000 rpm(revoluciones por minuto) por 5 minutos, 10 mg/ml de lisozimas, se encuba a 37 grados centígrados por una hora, 10 microlitros de proteína K y se encuba a 65 grados centígrados por una hora.

PURIFICACIÓN .- Permite separar completamente al ADN y nos permite observar al ácido nucleico como un precipitado de color blanco.

Se usan 500 microlitros de cloroformo, centrífuga a 14 000 rpm durate 5 minutos. El ADN se precipita con 500 microlitros de isopropenol.

CANTIDAD DE MUESTRA PARA EL ESTUDIO: 3 microlitros.

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WEBGRAFÍA

http://www.articulo.tv/?Usos-para-extraccion-adn&id=7401

http://biologiamolecularinteractiva.files.wordpress.com/2013/01/practica-no-2_-extraccion-de-adn.pdf

http://www.ehowenespanol.com/usos-extraccion-adn-sobre_109204/

Traducción y Diabetes Mellitus

En la grasa parda se han descubierto proteínas  desacoplantes  denominadas UCP-1, UCP-2 y UCP-3 cuya función es la regulación del gasto energético, además pueden ofrecer la prevención y el tratamiento de la diabetes mellitus.
La insulina es un importante promotor para la expresión de UCP-1 y del consumo de energía esta tiene una acción trófica sobre la grasa parda que explica la atrofia de este tejido disminuyendo el consumo energético y la perdida de peso en diabéticos.

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UCP-2 se expresa en la grasa parda, en el hígado, en las células beta del páncreas, pulmón, riñon, cerebro, hipotálamo e hipófisis. Regula  las funciones de las células beta y participan en la insuficiente secreción de insulina en respuesta al estímulo de la glucosa. El desacople de la mitocondria inducido por la UCP-2 disminuye las concentraciones de ATP en las células beta dificultando la secreción de insulina.

La UCP-3 regula la homeostasis de la glucosa en diferentes tejidos.

Estas proteínas se encuentran en la membrana interna de las mitocondrias y participan en la producción de calor en la grasa parda.

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BIBLIOGRAFIA

1. Magnus-Levy A. Über den respiratorischen Gaswechsel unter dem Einfluss der Tiroidea sowie unter verschie-denen pathologische Zustand. Berlin Klin Wochschr 1895; 32: 650-3.         [ Links ]
2. Himms-Hagen J, Ricquier D. Brown Adipose Tissue. In: Bray GA, Bouchard  James WPT, Eds. New York: Marcel Dekker Inc, 1998; pp 415-41.         [ Links ]
3. Himms-Hagen J. Brown adipose tissue thermogenesis and obesity. Prog Lipid Res 1989; 1828: 67-115. 

Transcripción y Diabetes Mellitus

La regulación de la expresión del gen localizado en 11p15.5 de insulina en células β pancreáticas es el resultado de la actividad coordinada de un número determinado de factores de transcripción ensamblados sobre diferentes elementos del promotor.

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Uno de estos factores importantes es la proteína Alx3 que se expresa en líneas celulares de insulina y somatostatina que son las hormonas más importantes para la regulación de la glucemia ( glucosa en sangre ); se une al promotor A3/4 de la insulina; induce la activación del promotor de insulina en combinación con factores de transcripción tipo bHLH y participa en los mecanismos que regulan el mantenimiento de la homeostasis de la glucosa a través de la liberación de insulina en sangre. 

WEBGRAFIA 

http://digitool-uam.greendata.es:1801/view/action/singleViewer.do?dvs=1381599015290~404&locale=es_ES&VIEWER_URL=/view/action/singleViewer.do?&DELIVERY_RULE_ID=4&frameId=1&usePid1=true&usePid2=true&COPYRIGHTS_DISPLAY_FILE=copyrightsTESIS

http://digital.csic.es/handle/10261/24732

Epigenética y Diabetes Mellitus

La Epigénetica es una ciencia que estudia los mecanismos que regulan las expresiones de los genes de los seres vivos, es determinado por factores ambientales como alimentación, drogas, entorno familiar y estimulos intelectuales que determinan las caracteristicas de cada individuo. Estos mecanismos son heredables para los descendientes.

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Las intervenciones en los estilos de vida están íntimamente relacionados con la aparición y elcurso temporal de la Diabetes mellitus. Con toda seguridad la asociación de esos factores con otros factores genéticos predisponentes interactúan para determinar un fenotipo caracterizado por la insulinorresistencia y las alteraciones en el metabolismo de la glucosa.

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Hoy en día se acepta que el ambiente temprano en el cual crece y se desarrolla un niño puede tener efectos a largo plazo en su salud.

Tomando todo esto en cuenta los tejidos involucrados en la Diabetes Mellitus pueden ser blanco de modificaciones epigenéticas inducidas por alteraciones epigenéticas en la vida intrauterina que se puede heredar en las células con capacidad proliferativa. Varios genes involucrados en el metabolismo de la glucosa han mostrado patrones de metilación como es el caso del gen GLUT4 que codifica una proteina transportadora de glucosa en células adiposas y musculares. Con la edad pueden incrementarse errores de metilación del ADN que se asocian con la progresión de la enfermedad.

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WEBGRAFÍA

http://www.cafyd.com/REVISTA/ojs/index.php/ricyde/article/view/239/154

http://www.epigeneticavargas.com/epigenetica.php

http://es.wikipedia.org/wiki/GLUT4